海藻酸微囊法冷冻保存绵羊精原干细胞研究2017-11-27

本研究以本实验室绵羊培养研究成果为基础, 建立一个高效的绵羊冷冻保存方法。常规的冷冻保存存在细胞存活率低下的问题, 从而严重限制了细胞在实践操作中的应用。近几年, 应用海藻酸微囊对小鼠骨髓间质干细胞、人类牙髓干细胞、小鼠胚胎干细胞、人类胚胎干细胞等进行冷冻保存研究已经取得很好的结果, 与常规的冷冻保存方法比, 干细胞存活率有了显著的提高。因此我们假设海藻酸微囊用于绵羊 的冷冻保存也会使细胞存活率显著提高。本研究选取作为绵羊的标记分子, 在评估干细胞存活率时以 作为干细胞特有标记, 为活细胞标记染料, 对冷冻保存前后绵羊的存活率进行研究, 取得了令人满意的结果。
精原干细胞是存在于雄性动物睾丸生精小管基膜上的生殖干细胞, 是雄性体内将遗传信息传递给后代的唯一成体干细胞, 能在不断自我更新的同时, 分化形成精母细胞 。鉴于携带遗传信息的完整性, 众多研究者基于不同的出发点去研究和应用精原干细胞。自 在啮齿类动物中移植成功后, 的研究和应用拓展到多种动物和多种用途。相关文章针对用 移植技术制作转基因动物这一技术进行了全面展望, 从中我们可以看出, 这一新技术的发展成熟将大大加速转基因动物制作的步伐。针对放疗和化疗所引起的不育症而言, 的移植技术为其患者带来了恢复生育能力的希望。移植技术也为濒危物种和良种家畜的保护或生成提供了新思路。从的干细胞特性出发, 可以将其进行抑制分化生成多能生殖干细胞用于再生医学和遗传医学。上述已有的研究表明, 在大规模品种改良、种质资源保存、转基因动物的制作、再生医学、不育症治疗等领域具有重要的应用前景。
该研究首次应用海藻酸微囊冷冻保存绵羊精原干细胞, 旨在提高绵羊的冷冻保存效率。冻存前后对绵羊存活率进行评估, 在绵羊液氮冻存后进行细胞培养和五个精原干细胞特异分子标记蛋白的免疫荧光鉴定。结果表明, 在液氮冻存后, 绵羊存活率从(单细胞悬液冻存组)提高到(海藻酸微囊包埋冻存组); 液氮冻存后, 单细胞悬液冻存组细胞存活率降低至而海藻酸微囊包埋组细胞存活率仍保持在。对液氮冻存后的细胞进行体外培养, 培养后, 海藻酸微囊包埋冻存组能形成典型的精原干细胞簇。进行细胞免疫荧光鉴定, 发现在微囊包埋冻存后 均显示阳性。海藻酸微囊的应用显著提高了绵羊的冷冻保存效率, 且对绵羊SSCs的标记基因表达无显著影响。该方法的建立为其他家畜及濒危动物种质资源保存提供了依据。