磁珠法动物组织基因组 DNA 提取的常见问题及参考意见2018-09-26

带你了解动物组织基因组 DNA 提取试剂盒（磁珠法）说明书
规格：50T
保存：磁珠可以在室温下（ 15-25℃）运输，但请在 4℃冰箱中保存，禁止冻存。蛋白酶 K 需-20℃保存，以保证其活性。其余试剂可以室温保存，更长时间的保存可置于 2-8℃。复检期 1 年。
产品说明：
本试剂盒采用具有独特分离作用的磁珠和缓冲液系统，可从样品中分离纯化高质量基因组DNA。特殊包被的磁珠在一定条件下对目的 DNA 具有很强的亲和力，而当条件改变时，磁珠释放吸附的 DNA，能够达到快速分离纯化 DNA 的目的。整个过程安全、便捷，提取的 DNA 纯度高。使用本试剂盒纯化的基因组 DNA 的 OD260/OD280 均在 1.7-1.9 之间，可以应用于各类下游分子生物学实验。使用前请先在漂洗液中配置 70%乙醇。若裂解液产生沉淀，使用前应将试剂盒内的溶液在室温放置一段时间，必要时可在 37℃水浴中预热 10min 溶解沉淀，摇匀后使用。
注意事项:
1. 动物组织（脾、肺、肾）要用液氮充分研磨。
2. 整个裂解过程操作尽量温和，并在要求时间内完成。
3. 如果组织液浓度较高，则建议磁珠量可适当增加，以获取高浓度 DNA。
4. 客户自备试剂：异丙醇、无水乙醇、蛋白酶 K。
5. 使用前请在漂洗液瓶中预先配制 70%乙醇。
6. 磁珠在使用前一定要充分混匀。
 常见问题及参考意见：
1. 得率低
（1）组织没有完全裂解完，裂解时间不够或没有离心直接进行下一步操作：可适当延长裂解时间，zui长不超过60 min。样品裂解后，请一定要离心后再进行下一步操作。
（2）结合不充分：结合过程中要使磁珠一直处于悬浮状态，并且充分颠倒混匀。
（3）取样量大于说明书给出量：取样量请严格按照说明书操作。
2. 条带弥散
（1）样品不新鲜或反复冻融多次：尽量用新鲜样品进行实验，如果样品需要保存，可根据实验，分装保存样品，尽量避免反复冻融；
（2）环境温度太高：可以将研钵置于-20℃预冷或置于液氮保存后再进行研磨，如果所提取材料基因组DNA极易降解，可用液氮研磨；
（3）裂解时间太长：裂解时间不要超过60 min；
（4）提取后模板DNA放置时间太长：提取后如有需要，请尽量及时进行凝胶电泳实验。短期内可置于4℃保存，长期请置于-20℃保存（尽量注意避免反复冻融）。
3. DNA液有颜色
（1）洗涤过程不充分：如果结合后磁珠呈团状、 丝状或颗粒状，可增加点阵力度及次数，充分吹打混匀。
（2）裂解不充分：适当增加裂解液S1和S2用量，也可以延长裂解时间。
（3）样品用量大于说明书给出量而其他试剂用量没有相应调整：严格按照说明书操作，如果需要增大样本量，可以等比例增加裂解液S1、S2以及磁珠用量，其他试剂用量不变。
4. DNA样品不纯，干扰后续实验
(1）DNA液有乙醇残留：洗涤时，请注意吸净管盖及管底的残液。此外，磁珠应完全干燥，保证无乙醇残留。
（2）磁珠洗涤不充分：加入70%乙醇溶液时，请吸打或点阵混匀。如有必要，可增加一次洗涤步骤。
（3）DNA液中吸入磁珠：如果不小心吸入磁珠，请将上清液返回原管，待磁珠完全吸附至管壁后重新吸取上清。或者将吸取的上清液10000 rpm离心2 min，再取上清。
（4）DNA液中含有蛋白质等杂质：建议适当减少样品用量。或可重复一次提取过程去除杂质。
（5）DNA液中含有轻微盐离子等杂质，此为洗脱液（含有抑制核酸降解的成分）正常现象，不影响实验，可将获得的DNA置于-20℃环境分装保存。