为什么ELISA实验的样本都要进行稀释工作2018-10-10

ELISA试剂盒很多人都是知道的，那你知道吗，其实每一份ELISA试剂盒里面都有着一份说明书，里面介绍了样本稀释的比例。这时候就有很多人就要问了，为什么ELISA实验的样本都要进行稀释工作？

在ELISA试剂盒实验血清为什么要稀释？有两个原因：

1）竞赛抑制比较显着，应稀释竞赛物；

2）以下降非特异性反响，使特异性的抗原抗体反响充分体现出来。

血清稀释用一般的PBS即可，可加1％的BSA，能有用下降ELISA本底，当然假如你嫌费事我觉得用生理盐水代替PBS关系也不大。不论你是用直接竞赛仍是直接竞赛，血清的稀释倍数肯定要事前断定，但也不必一点点，你做一个预试验即可，挑选OD在1.0左右的稀释倍数，即你的竞赛ELISA中阴性孔OD在1.0，这样作出来的曲线比较敏感。

ELISA试剂盒试验稀释血清的过程：

先把蛋白稀释必定的倍数，比如说10倍、20倍稀释（这样能够大体断定一个参数），将抗原进行一系列稀释包被微量反响板，再用必定稀释度的阳性参阅血清和阴性参阅血清进行孵育后洗刷，再加酶结合物进行反响，经孵育洗刷后，加底物溶液显色，停止反响后别离测定O.D值，挑选O.D值≥1.0的那个抗原稀释度为zui适包被浓度。一般总是要挑选那个O.D值稍大于1.0，而不挑选小于1.0的抗原浓度。阴性参阅血清O.D值要求<0.1-0.2。也就是要求阳性参阅血清和阴性参阅血清的O.D值有显着不同。