细胞磷酸化蛋白提取有哪些方法呢？2019-04-16

                                                     细胞磷酸化蛋白提取有哪些方法呢？

方法：

1.       提取液制备：每500ul冷的蛋白提取液中加入2ul蛋白酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。

2.       取5-10×106个细胞①，在4℃，1000rpm条件下离心5-10分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集细胞。

3.       用冷PBS洗涤细胞两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。

4.       每5×106个细胞中加入500ul冷的蛋白提取液，混匀后，在4℃条件下振荡15-20分钟。

5.       在4℃，14000rpm条件下离心15分钟。

6.       快速将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到磷酸化蛋白。

7.       将上述蛋白提取物定量②后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验③。

 
方法：

1.       提取液制备：每500ul冷的蛋白提取液中加入2ul蛋白酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。

2.       取100mg组织样本剪碎，加入总蛋白提取液，用组织匀浆器匀浆至无明显肉眼可见固体①。

3.       将组织匀浆吸入一预冷的干净离心管中，在4℃，10000rpm条件下离心5分钟。

4.       将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到磷酸化蛋白。

5.       将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。