细菌的培养及操作方法2019-08-07

细菌的培养及操作方法
是缘分给了我们相知的良机，是上帝让我们在人海中相遇，是友情让我们彼此相依，是月老使我们牵手相聚，是生活给了我们互敬互爱的情谊，是你让我知晓了爱情的真正含义。你就是我的亲密爱人，我会每天把暖暖的祝福送给你！  大肠杆菌是含有长约3000kb的环状染色体的棒状细胞。它能在仅含碳水化合物和提供氮、磷和微量元素的无机盐的培养基上快速生长。当大肠杆菌在培养基中培养时，其开始裂殖前，先进入一个滞后期。然后进入对数生长期，以20~30min复制一代的速度增殖。
操作步骤
（一）LB培养基的配制
配制每升培养基，应在950m1去离子水中加入：
细菌培养用胰蛋白胨 10g
细菌培养用酵母提取物 5g
摇动容器直至溶质完全溶解，用1mol/L 调节pH位至7.0。加入去离子水至总体积为，在15  (1.034×10⁵Pa)高压下蒸气灭菌20min，即为LB液体培养基。
LB固体培养基是在其液体培养基的基础上另加琼脂粉15g/L。
细菌的培养
（１）在液体培养基中培养
1、过夜培养
⑴取5ml液体培养基加入一只无菌的试管中。
⑵用接种环或灭菌牙签挑一个单菌落，接种于培养液中。
⑶盖好试管，在摇床上以60r/min速度，于37℃过夜培养。
２、大体积培养
⑴按1∶100的比例将过夜培养物加入到一无菌烧瓶中，烧瓶的体积应该是培养液体积的5倍以上。
⑵于37℃，约300r/min剧烈摇动培养。
（２）在固体培养基中培养 细菌在固体培养基上培养主要是为了获得单菌落和短期保存。
平板划线法分离单菌落
⑴采用无菌技术，用接种环将接种物从平板的一侧开始划线。
⑵重新消毒接种环，从一划线处将样品划线至平板的其余部分，重复划线直至覆盖整个平板。
⑶于37℃培养直至长出单菌落。