一、实验目的
1、掌握PCR法扩增目的基因片段的基本原理与方法；
2、通过PCR验证目的基因片段是否插入质粒中；
3、充分理解本学期三次分子实验的原理、联系与意义。
二、实验原理
分子生物学实验技术基本原理
PCR（Polymerase Chain Reaction）即聚合酶链式反应，是指在DNA聚合酶催化下，以母链DNA为模板，以特定引物为延伸起点，通过变性、退火、延伸等步骤，体外复制出与母链模板DNA互补的子链DNA的过程。是一项DNA体外合成放大技术，能快速特异地在体外扩增一定长度的DNA片段。可用于基因分离克隆，序列分析，基因表达调控，基因多态性研究等许多方面。
在高温（94℃）下，待扩增的靶DNA双链受热变性成为两条单链DNA模板；而后在低温（37～55℃）情况下，两条人工合成的寡核苷酸引物与互补的单链DNA模板结合，形成部分双链；在普通Taq酶的最适温度（72℃）下，以引物3’端为合成的起点，以d NTP为原料，沿模板以5’→3’方向延伸，合成DNA新链。这样，每一双链的DNA模板，经过一次解链、退火、延伸三个步骤的热循环后就成了两条双链DNA分子。如此反复进行，每一次循环所产生的DNA均能成为下一次循环的模板，每一次循环都使两条人工合成的引物间的DNA特异区拷贝数扩增一倍，PCR产物得以2n的形式迅速扩增，经过25～30个循环后，理论上可使基因扩增10 倍以上。
