肿瘤细胞株的传代培养方法与步骤2020-01-03

传代细胞是指来自人或动物的肿瘤组织或正常组织的细胞，其染色体组型发展为非整倍体或二倍体低于75％，这种非整倍体细胞在体外具有无限传代的生命力，通常具有异种移植的能力和较广泛的病毒敏感性。
传代细胞的特性是：①具恒定繁殖特性，少数细胞即有繁殖能力，在琼脂内能形成克隆；有的为贴壁生长，有的悬浮生长。②染色体组型为异倍体，大多数人源细胞染色体为60－70 条左右。③保留种属特异性，但组织分化性与脏器特性均消失。
方法与步骤（1）选生长良好的HeLa 细胞一瓶，轻轻摇动培养瓶数次，悬浮起浮着在细胞表面的碎片，然后连同生长液一起倒出，用Hanks 液洗一次。
（2）从无细胞面侧加入0．25％胰蛋白酶液或胰蛋白酶一EDTA 消化液4－5ml，翻转培养瓶，使消化液浸没细胞1min 左右。
（3）翻转培养瓶，放置5—10min，为促进细胞的消化，可以加入37℃预热的消化液，或在细胞面向上时，用手掌贴着细胞面的瓶外壁，待肉眼观察细胞面出现布纹孔状为止。
（4）倒出消化液，如系EDTA 消化，需沿细胞层的对面加Hanks 液4．5m1 洗涤，洗涤时轻轻转动培养瓶，让液体在瓶内慢慢流动，以洗掉消化液；如系胰蛋白酶消化，倒掉胰酶后可不洗涤。（5）沿细胞面加入适量新配制的生长液，洗下细胞，并用吸管吹打数次，使细胞分散开，按1：2 或1：3 分配传代培养。
（6）37℃培养，接种后30min 左右可贴壁，48 小时可换生长液，一般3—4 天可形成单层，形成单层后再换维持液供试验用。