细胞培养中常出现一些黑点,是污染吗?
首先肉眼观察培养液是否变浑浊,如果变浑浊,基本可以确定是污染;如果肉眼观察培养液没有变浑浊:在显微镜下观察黑点大小和形状是否规则,是否运动,是做布朗运动还是呈直线型快速移动。如果黑点大小不规则,做布朗运动,黑点可能是细胞碎片(可能是细胞状态不佳或者消化过度引起的),也可能是血清反复冻融产生的蛋白沉淀引起的,也可能是细胞的代谢产物。如果黑点大小一致,快速移动,很可能是细菌污染。
如何预防细胞培养中黑点的产生?
掌握细胞传代的最佳时机,不要细胞长老了再传代;掌握好消化时间,防止消化过度产生细胞碎片;减少血清等试剂的冻融次数;将培养液的PH调到最佳;严格控制水质和器皿的清洁。