小鼠Elisa试剂盒原理与处理要求2020-12-23

小鼠Elisa试剂盒实验原理：

小鼠Elisa试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被小鼠白介素15受体α（IL-15Rα）捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成*终的黄色。颜色的深浅和样品中的小鼠白介素15受体α（IL-15Rα）呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。

小鼠Elisa试剂盒注意事项：

1、小鼠Elisa试剂盒应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。

2、实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。

3、不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。

4、使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器。

5、使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。

6、洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。

7、底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取OD值。

8、加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。

9、按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。

小鼠Elisa试剂盒样本处理及要求：

1.  血清：将收集于血清分离管的全血标本在室温放置2小时或4℃过一夜，然后1000×g离心20 分钟，取上清即可，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

2.  血浆：用EDTA或肝素作为抗凝剂采集标本，并将标本在采集后的30分钟内于2-8℃ 1000×g离心15分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

3.  组织匀浆：用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果），称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS（一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样品对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂）加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟，取上清检测。


4.  细胞培养物上清或其它生物标本：请1000×g离心20分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。