解析提取RNA时RNA降解原因:
1、新鲜细胞
裂解液的量不足,使得裂解不充分。
2、新鲜组织
某些含有内源性核酸酶的样品,很难避免RNA酶的降解,建议采用的方法为在液氮条件下将组织研碎,并且,匀浆时采用更多的裂解液。
3、冷冻样品
样品取材后应该迅速置于液氮中冷冻存放,然后转移到-70℃冰箱存放。如果未经液氮速冷直接转移到-70℃冰箱存放,会造成RNA缓慢降解。样品研磨后,在液氮刚刚挥发完时,将样品迅速转移到含裂解液的容器中,立即混匀匀浆。
4、外源 RNA 酶的污染
试剂、器械等实验用品应该采用DEPC 水灭菌处理。
5、内源 RNA 酶的污染
抑制剂失效或者用量不够,实验样品过多或者匀浆温度过高。