抗体(英语:antibody),抗体是一类能与抗原特异性结合的免疫球蛋白。(免疫球蛋白不仅仅只是抗体)是一种由浆细胞(效应B细胞)分泌,被免疫系统用来鉴别与中和外来物质如细菌、病毒等的大型Y形蛋白质,仅被发现存在于脊椎动物的血液等体液中,及其B细胞的细胞膜表面。检测任何目的靶蛋白都有不止一种抗体可供选择,为缩小抗体的选择范围选中合适的抗体,需要考虑的因素:
1. 实验应用的类型
一般抗体说明书都列出该抗体经试验验证过适用于何种分析类型,如:可以应用于WB /IHC /ICC /ELISA分析等,如果抗体说明书没有说明提及的应用类型,并不意味着该抗体不适用于此种分析应用类型,而仅是说明尚未经过此种分析试验验证。如果抗体不适用某些分析试验,会在抗体说明书上标注出来不适于某分析试验。
2. 样本蛋白的提取或处理
某些抗体要求样本经过某些特殊处理,例如:许多抗体只识别还原和变性的、表位已暴露不受二级四级结构阻碍的蛋白样本,另一方面,某些抗体只识别天然折叠的蛋白。当选择免疫组化的抗体时,应注意某些抗体只识别未固定的冷冻的组织,而另一些抗体则使用于无需抗原修复解交联步骤的甲醛固定石蜡包埋的组织,这些都会在抗体说明书上应用部分标示出来。
所以综上所述:
适用于IP(天然蛋白)的抗体不一定适用于WB(表位暴露)
适用于WB的不一定适用于IHC
适用于IHC-P(抗原修复)的不一定适用于IHC-Fr(不修复)
购买前,务必仔细阅读抗体说明书!
3. 样本的物种
一般来说,在使用偶联二抗结合无偶联物的一抗时,一抗宿主动物的物种选择比较重要,对与免疫组化而言,尽可能选择与样本不同种系物种的一抗,从而避免二抗与样本内源性免疫球蛋白产生交叉反应。一抗的来源主要有兔子和小鼠这两个物种,意思也就是,如果你的样本是兔子的,那就避免买兔来源的一抗;如果你的样本是小鼠的,那就避免买小鼠源的一抗。
4. 单克隆与多克隆
由一种克隆产生的特异性抗体叫做单克隆抗体,单克隆抗体能目标明确地与单一的特异抗原决定簇结合。同一个抗原决定簇在机体内也可以由好几种克隆来产生抗体,形成好几种单克隆抗体混杂物,称为多克隆抗体。
在抗原抗体反应中,一般单克隆抗体特异性强,但亲和力相对小,检测抗原灵敏度相对就低;而多克隆抗体特异性稍弱,但抗体的亲和力强,灵敏度高。