显色是ELISA中的后一步温育反应，此时酶催化无色的底物生成有色的产物。反应的温度和时间仍是影响显色的因素。在一定时间内，阴性孔可保持无色，而阳性孔则随时间的延长而呈色加强。ELISA显色淡的原因及解决方案:
原因一：试剂盒在运输途中时间太长，温度太高。
解决方案：尽量缩短运输时间，夏季应放冰块降温。
原因二：试剂盒未充分平衡。
解决方案：试剂盒从2～8℃冰箱取出后打开盒盖，于室温平衡至少20分钟，确保所有试剂已平衡至室温（约25℃）。
原因三：培养箱温度不足37℃。
解决方案：注意培养箱温度，放入反应板后尽量减少开启次数以免影响温度恒定，非隔水式培养箱尤其应注意。
原因四：保温时间不足。
解决方案：校正定时钟准确定时。
原因五：洗涤时冲击力太大、浸泡时间过长、洗涤次数增加。
解决方案：按说明书要求保留洗涤时间，准确记住洗涤次数。
原因六：移液器吸液量不足，吸嘴内壁挂水太多或内壁不清洁。
解决方案：校正移液器，吸嘴要配套，装吸嘴时要紧密，吸嘴内壁要清洁，一次性使用。
原因七：蒸馏水水质有问题。
解决方案：使用新鲜合格的蒸馏。
原因八：底物作用时间不足。
解决方案：准确定时。
显色一定要控制时间，根据试剂盒说明操作即可。一般来说，显色时间过短，结果偏低；显色时间过长，空白增高或者非特异性显色增加。
