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免疫组化实验评判结果方法阐述2023-12-18

免疫组织化学(Immunohistochemistry)又称免疫细胞化学,是根据抗原抗体反应和化学显色原理,组织切片或细胞标本中的抗原和一抗结合,再利用一抗与标记生物素的二抗进行反应,前者再用标记辣根过氧化物酶(HRP)或碱性磷酸酶(AKP)等的抗生物素(如链霉亲和素)结合,最后通过呈色反应在光学显微镜下可清晰看见细胞内发生的抗原抗体反应物,从而原位确定特定蛋白质的分布和含量。免疫组化,是应用免疫学基本原理——抗原抗体反应,即抗原与抗体特异性结合的原理,通过化学反应使标记抗体的显色剂(荧光素、酶、金属离子、同位素)显色来确定组织细胞内抗原(多肽和蛋白质),对其进行定位、定性及相对定量的研究。想要在做完实验评判结果,现有简单易学三种方法。

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(1)阳性着色细胞计数法

在40光镜下,随机选择不重叠的10个视野,人工或机器计数阳性着色细胞,每组3~6张不同动物组织切片,然后进行组间比较即可。

(2)灰密度分析法

通过在不同组别和不同动物组织切片上选择相同区域、相同条件下用image j进行灰密度分析,然后进行统计分析即可。

(3)评分法

通过在光学显微镜下对组织切片分别按染色程度(0~3分为阴性着色、淡黄色、浅褐色、深褐色)、阳性范围进行评分(1~4分为0~25%、26~50%、51~75%、76~100%),终了时可以分数相加,再进行比较。

对于以上这几种方法,各有利弊,请细心选择。要想得到正确结果的前提是您要做出着色均匀、背景很浅的高质量切片。

   

 

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