实时荧光定量PCR技术（Real-time quantitative PCR）是一种用于实时扩增和检测特定 DNA 或 RNA 序列的分子生物学技术。是指在PCR反应体系中加入荧光基因，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。
荧光定量PCR以其特异性强、灵敏度高、重复性好、定量准确、速度快、全封闭反应等优点成为了分子生物学研究中的重要工具，目前已得到广泛应用（如转基因动植物检测、RNAi基因失活率检测、病原微生物或病毒含量检测、基因差异表达、基因分型）。
内容:
1、根据目的基因设计引物及引物合成；
2、RNA抽提+逆转录；
3、RNA定量及质量分析；
4、使用荧光染料SYBR Green法进行实时定量PCR（重复三次）；
5、数据处理。
RT-qPCR原理的三个主要步骤：
1、反转录：
使用逆转录酶和特定引物将RNA样品反转录成cDNA。
该步骤将RNA模板转化为更稳定且可扩增的DNA形式。
反转录过程中使用特定引物。
2、PCR扩增：
使用特定引物对cDNA进行PCR扩增，这些引物环绕目标区域。
PCR是一个循环过程，呈指数级扩增DNA模板的数量。
PCR反应中包含荧光染料或探针，它们结合到扩增的DNA序列上并发出荧光信号。
3、荧光实时检测：
使用实时PCR仪器实时监测荧光信号。
荧光的数量与每个PCR循环中扩增的DNA数量成比例。
使用专业软件分析数据以确定循环阈值（Ct）值，该值表示荧光信号达到特定阈值水平所需的循环数。Ct值用于计算原始样品中存在的目标DNA量，从而允许进行基因表达或病毒载量等定量分析。
