无菌的概念指用物理或化学方法使存在于产品中的所有微生物（包括最耐热的细菌芽孢）失去活性，使它不能有生存和繁殖的机会（绝对无菌） 。微生物无菌室消毒方式具体过程如下：
1.紫外线消毒
①在室温20℃~25℃时,220V 30W紫外灯下方垂直位置1.0m处的253.7mm紫外线辐射强度应≥70uW/cm2,低于此值时应更换。适当数量的紫外灯,确保平均每立方米应不少于1.5W。
②紫外线消毒时,无菌室内应保持清洁干燥。
③在无人条件下,可采取紫外线消毒,作用时间应≥30min。室内温度<20℃或>40℃、相对湿度大于60%时,应适当延长照射时间。
④用紫外线消毒物品表面时,应使照射表面受到紫外线的直接照射,且应达到足够的照射剂量。
⑤人员在关闭紫外灯至少30min后方可入内作业。
⑥按照GB15981的规定,评价紫外线的消毒与杀菌效果。
2.臭氧消毒
①封闭无菌室内,无人条件下,采用20mg/m3浓度的臭氧,作用时间应≥30min。消毒后室内臭氧浓度≤0.2mg/m3时方可入内作业。
②按照GB/T18202的规定,检测室内臭氧的浓度。
3.无菌室空气灭菌效果验证方法(沉降法)
①在消毒处理后与开展检验活动之前期间采样。
②取样位点的选择应基于人员流量情况和做试验的频率。一般情况下,无菌室面积≤30m2时,从所设定的一条对角线上选取3点,即中心1点、两端各距墙1m处各取1点；无菌室面积≥30m2时,选取东、南、西、北、中5点,其中东点、南点、西点、北点均距端1m。
③在所选位点,将平板计数琼脂平板(90mm)或水化3 M Petrifilm菌落总数测试片置于距地面80cm处,开盖暴露15min,然后,置于36℃士1℃恒温箱培养48h土1h。如果侦查某目标细菌,则可用选择性琼脂平板(如PDA平板)或微生物测试片(如3 M Petrifilm环境李斯特氏菌测试片)。
④确认平板上的菌落数,如大于所设定的风险值,应分析原因,并采取适当措施。
