酶联免疫吸附试验 (ELISA)是以免疫学反应为基础，将抗原、抗体的特异性反应与酶对底物的高效催化作用相结合起来的一种敏感性很高的试验技术。
ELISA实验操作简单，但其影响因素却很多,其中一个因素的改变可能会影响到其它条件的改变,最终影响整个结果的准确性。
ELISA试验影响操作因素:
1、标本
对于血清标本，采集血液时需注意溶血。此外，为避免细胞裂解释放出目标检测分子影响实验，检测物宜进行离心去除细胞成份。
2、加样
确保将所加物加至板孔底部，避免加在孔壁上部，不可溅出或产生气泡。加不同物质时应注意更换枪头，避免发生交叉污染。显色时，最好使用排枪迅速完成加液过程，以减少反应时间不一致引起的孔间差异。
3、稀释
在稀释过程中,要注意使用同一微量加样器、同一类枪头和容器,保证所稀释液体容量一致。
4、孵育
37℃恒温箱孵育时，酶标板应放在湿盒内,湿盒应选用传热性良好的材料如金属等,在盒底垫湿纱布,并将酶标板放在湿纱布上，酶标板不可叠放,以保证各板的温度能迅速平衡。孵育时间一般为1～1.5h，不宜过长。如采用4℃孵育,则应将酶标板包好,以免试剂与外界反应或蒸发。
5、 洗涤
应严格按要求洗涤,保证洗涤液注满各孔,洗完板后最好在吸水纸(干净、无或少尘的吸水材料)上轻轻拍干,并应严格遵守洗涤时间。
6、显色
显色液应现用现配；加样的工作环境不能处于阳光直射的环境下，加完显色液后要避光反应，显色液量不能过多，以免显色过强。
7、读板
比色前应先用洁净的吸水纸擦干酶标板底附着的液体,以减少干扰。酶标仪应安置在避光环境下，操作室温宜在15～30℃，在使用前应先预热酶标仪15-30分钟，使测定结果更加稳定。
ELISA试验相关操作技巧如下：
1.切记在加酶试剂后用吸水纸在酶标板表面轻拭吸干。
2.合理安排检测量，以免反应板过多造成洗板等待时间长。
3.在吸取液体时，要用量程和需要量接近的枪去吸，减少误差。
4.务必做双孔实验，这样才既能保证数据的准确性，又能反映出试剂盒的精密度。
5.样品稀释液应用加液器加注，并经常校对其准确性。
6.为防止样品蒸发，试验时将反应板放于铺有湿布的密闭盒内，酶标板加上盖或覆膜。
7.未使用完的酶标板或者试剂，请于2-8℃保存。辣根过氧化物酶标记抗人IgG工作液请依据所需的量配置使用。请勿重复使用已稀释过的辣根过氧化物酶标记抗人IgG工作液。
8.ELISA试剂盒实验中，加样后及时放人孵箱，标本较多时，要分批操作。按说明步骤严格控制操作时间，防止孵育时间人为延长，导致非特异性结合紧附于反应孔周围，难以清洗彻底。
9.剩余样品及废弃物应经121℃高压蒸汽灭菌30分钟，或用5.0g/L次Lv酸钠等消毒剂处理30分钟后废弃。
10.人ELISA试剂盒洗涤时各孔均需加满液体，防止孔口有游离酶不能洗净。
11.每次实验留一孔作为空白调零孔，该孔不加任何试剂，只是最后加底物溶液及2N H2SO4。测量时先用此孔调OD值至零。
12.手工洗板时每次加入洗涤液后。应静置15～30s，不要将一个酶标孑L中的洗涤液溅入另一酶标孔中，防止交叉污染。甩去洗涤液后将酶标板放在毛巾或吸水纸上拍干。
13.对样本的结果有疑问时需要使用其他检测方法进行验证。
14.没有去离子水或双蒸水时，可以使用娃哈哈纯净水配制溶液，切勿使用自来水。
15.在使用微量加样器时，吸取不同瓶子中液体后要更换枪头，即使吸取标准品溶液。
16.吸取液体时速度不易太快，以免产生气泡，人ELISA试剂盒吸取的量不够准确。
17.吸取液体时要选用量程和需要量接近的微量加样器吸，减少误差。
掌握了这些实验技巧之后，在做ELISA实验中，试验起来会更熟练，大大的降低了实验过程中的风险，ELISA试剂盒实验的入门新手掌握了这些知识后，操作起来都会快的多。
