酶联免疫吸附测定enzyme linked immunosorbent assay（简写ELISA）指将可溶性的抗原或抗体结合到聚苯乙烯等固相载体上，利用抗原抗体结合专一性进行免疫反应的定性和定量检测方法。OD是optical density（光密度）的缩写，表示被检测物吸收掉的光密度，是检测方法里的专有名词，检测单位用OD值表示，1OD＝1og（1／trans），其中trans为检测物的透光值。 光通过被检测物，前后的能量差异即是被检测物吸收掉的能量，特定波长下，同一种被检测物的浓度与被吸收的能量成定量关系。在ELISA试剂盒实际实验步骤中的影响因素较多，熟练的掌握操作技巧必定会事半功倍。下面解析ELISA试验“OD”值不正常现象：
1.试剂盒未回温（对应解决方法：试剂盒回温到25℃）；
2.温度控制不好（对应解决方法：控制正确温度）；
3.孵育时间不准确（对应解决方法：控制孵育时间）；
4.洗涤时冲击力太大、浸泡时间过长、洗涤次数增加（对应解决方法：洗涤4-5次，每孔250ul，然后拍干）；
5.阳光直射，对着风直接吹（对应解决方法：避风避阳）；
6.酶标仪的波长错误elisa试剂盒（对应解决方法：酶标仪的波长450nm）；
7.抗体的稀释错误（对应解决方法：正确的稀释抗体）；
8.水质问题（对应解决方法：用娃哈哈矿泉水代替）。
OD值超出正常范围原因与解决方法：
注意事项：
1、试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。
2、实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。
3、使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器。
4、加入试剂的顺序一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。
5、按说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。
