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抗体运输储存关键点梳理2024-10-21

      抗体(antibody)指机体的免疫系统在抗原刺激下,由B淋巴细胞或记忆细胞增殖分化成的浆细胞所产生的、可与相应抗原发生特异性结合的免疫球蛋白。主要分布在血清中,也分布于组织液及外分泌液中。

        抗体具有严密的三维结构,已进化成为在大多数生物环境中,甚至机体大面积创伤时也能保持其活性。抗体紧凑的三维结构使抗体能抵御轻度变性的环境,从而也使抗体的长期存放较为容易。通常需要将甘油或其他稳定剂加到储存的缓冲剂中,以保持实验室中纯化的蛋白活性。

       抗体作为免疫学实验常用的工具之一,属于一种昂贵的试剂,作为价格如此昂贵的商品,抗体运输储存条件还相当苛刻。下面梳理一下抗体运输储存的几个关键点:

一、运输条件

一般抗体快递运输需要2-3天左右,所以需要在低温条件下来完成的。低温运输一般分为冰袋和干冰两种,由于大多数抗体都是4℃或-20℃保存,而干冰温度能达到-78.5℃,如果使用干冰运输,那么抗体将被冰冻,收到抗体保存时,按照说明书放4℃或者-20℃,抗体就多了一次冻融过程,所以运输过程中一般避免干冰运输,而选择4℃运输,最主要的目的是为了避免反复冻融影响抗体的活性。

二、离心处理

收到的货的抗体,不管是液态、还是粉末状,拿到产品的第一件事一定是:不要开盖,直接离心!一般情况 4℃,12000rpm,离心 3 分钟即可 如抗体体积较小(如20ul,50ul这种小规格)可适当延长离心时间。原因:运输过程中的颠簸会让抗体液滴/粉末会附着在管盖和管壁上,肉眼有时候难以观察到管内情况,贸然拧开管盖很有可能将抗体洒落导致浪费所以开盖前一定要进行离心,让抗体沉到管底。

三、储存温度

实验室里面一般会有4℃、-20℃、-80℃三个不同温度的储物冰箱。那么抗体应该储存在哪个温度呢?答案是:因产品而异,以说明书为准!原因:不同品牌、不同种类的抗体由于产品性质(固态、液态、标记与否)、添加剂(甘油、叠氮钠、牛血清蛋白)的不同,导致储存条件差异。总结如下:

1、液态抗体,由于本质是活性蛋白溶液,-80℃保存会被冷冻结冰,反复冻融会造成蛋白变性和多聚体形成,降低抗体有效浓度及结合能力。因此液态抗体保存推荐4℃和-20℃两个条件,未添加甘油,4℃保存,能储存一个月左右;添加了甘油,-20℃保存,能储存一年以上。

不同抗体的储存环境、被取用频率、以及抗体本身稳定性都有差别。假设超过一年,也不代表抗体立刻失去效用,只是效价会逐步降低。

2、特殊抗体流式抗体由于标记物为荧光素(FITC、PE、APC等),对光十分敏感,且低温会干扰荧光素与抗体偶联,导致荧光素脱离,故一般采用不加甘油4℃避光保存;HRP(辣根过氧化物酶)标记抗体本身不用刻意避光,一般采用加甘油-20℃保存即可,但是HRP的底物一般需4℃避光保存;即用型抗体是厂家配制的工作液,可直接使用,建议4℃保存。

以上储存时间都是针对新订购的抗体溶液;对于自己动手稀释的工作液,推荐现配现用,不建议重复利用,4℃可以短期保存(一到两周)。3、冻干粉抗体,稳定性高,可在-20℃、-80℃条件中长时间保存(长达数年),4℃环境也较为稳定,因此权衡各种因素,冻干粉抗体一般推荐-20℃保存,取用方便,保存时间长;粉末状抗体溶解后即变成液体状态抗体,保存条件发生变化。

四、稳定剂

抗体作为一种具有活性的大生物分子,需要储存在一个相对稳定的环境,为此我们可以在抗体溶液中加入不同的添加剂以稳定抗体溶液性质。

1、甘油(glycerol),甘油可作为抗体保护剂,溶液中加入甘油能够降低冰点,50%(v/v)的甘油能够将抗体溶液冰点降至-20℃以下,保证溶液不结冰,避免冻融。

任何浓度的甘油溶液都不能让抗体溶液冰点降至-80℃以下,故加入甘油的抗体溶液依旧会在-80℃冰箱结冰。

2、叠氮钠(NaN3,sodium azide),叠氮钠可作为抗体防腐剂,抑制各种微生物的生长,防止抗体溶液染菌,延长抗体保存时间,叠氮钠常用工作浓度为0.02% (w/v)。其本质是呼吸链阻断剂,和氰化物一样可以阻断生物氧化呼吸链的最后一步,剧毒;易与金属发生反应,勿用铁勺取用;易发生爆炸,勿猛烈碰撞

叠氮钠由于生物毒性,故不适用于活细胞和体内实验的抗体;同时叠氮钠会抑制HRP活性,故也不能用于HRP标记的抗体,必要时可通过透析或超滤除去抗体溶液中的叠氮钠。对于不能用叠氮钠或硫柳汞的情况可使用捷倍斯生物GBCBIO® Buffpro 300 替代硫柳汞和叠氮钠。GBCBIO® Buffpro 300是一种专用于体外诊断试剂的高效防腐剂和抑菌剂,可用于各种体外诊断试剂、酶制剂、缓冲液等含水试剂产品中,且适用于 Western blot、免疫组化、免疫荧光、ELISA等检测试剂的抑菌和防腐产品优势:

抑菌性强Buffpro 300 对细菌和真菌、和霉菌均有抑菌效果, 低剂量时即有很好的抑菌防腐效果且持续长效。

兼容性广Buffpro 300 不含金属离子,适应众多体系,与体系中的关键酶或诊断指示剂兼容,不会抑制抗体结合。

稳定性高:适用pH范围广(pH2.5~8.5),在各种缓冲溶液如Tris、TES或HEPES等pH7左右的溶液中化学稳定性好,推荐温度下未开封产品可以稳定保存三年以上。

安全性好:在推荐的使用浓度下,无毒性,无健康风险;无生态蓄积性,环境友好。除了Buffpro 300 以外,Buffpro 150Buffpro 950也在体外诊断试剂、酶制剂、缓冲液、清洗液等含水试剂产品中具有显著防腐抑菌效果。

3、牛血清蛋白(BSA),牛血清蛋白一般作为抗体稳定剂。通常情况下,蛋白质以高浓度保存会更加稳定,不易发生降解和变性,BSA的添加可以让抗体溶液整体的蛋白浓度增加;同时抗体蛋白会被塑料或玻璃材质的管壁吸附,降低有效浓度,加入抗体稳定剂则会通过竞争性结合减少这种吸附效应。

如果抗体需要做标记实验或是定量测试,添加的BSA可能会产生干扰。

五、分装技巧

分装可以最大限度地减少因反复冻融导致的损失,因为反复冻融会使抗体变性,导致抗体形成聚合物,从而降低抗体的结合能力减少因多次移液引发的污染。对于普通抗体只需要按使用需求进行分装:

1、常规抗体出厂即添加50%甘油,-20℃保存不会结冰,不存在反复冻融风险;

2、由于抗体溶液体积一般都比较小,管壁的吸附作用、水蒸气的冷凝作用都不容忽视,两种效应会使得分装后抗体的有效浓度降低,效价降低

六、特殊的抗体

1、酶标抗体,碱性磷酸酶和辣根过氧化物酶标记的抗体对于冷冻特别敏感,一般在4℃短期存储,长期保存最好是在终浓度为50%的甘油中于-20℃保存。虽然某些酶可在无保护剂的情况下于-20℃储存,但必须分装,反复冻融会降低酶活力或促进抗体聚集,影响抗体结合能力。

2、流式抗体(荧光素标记抗体),流式抗体由于标记物为荧光素(FITC、PE、APC等),对光十分敏感,需要避光保存。此外,荧光素特别是蛋白类荧光素,荧光基团是嵌在蛋白结构内部,冷冻会破坏蛋白的结构,从而影响荧光效率;而化学荧光基团在反复冻融之后也会淬灭,故一般采用不加甘油4℃避光保存。

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