大部分ELISA检测均以血清为标本。血清标本可按惯例方法收集，应留意防止溶血，红细胞溶解时会释放出具有过氧化物酶活性的物质，以HRP为符号的ELISA测定中，溶血标本可能会添加非特异性显色。血清标本宜在新鲜时检测。如有细菌污染，菌体中可能含有内源性HRP，也会发生假阳性反应。
一般说来，在5天内测定的血清标本可放置于4℃。超越一周测定的需-20℃保存。冻住血清融解后，蛋白质局部浓缩，散布不均，应充沛混匀并防止发生气泡。混浊或有沉积的血清标本应先离心或过滤，弄清后再检测。重复冻融会使抗体效价下跌，所以测抗体的血清标本如需保存作屡次检测，宜少量分装冰存。保存血清自收集时就应留意无菌操作，也可参加适当防腐剂。
ELISA实验操作：
1.加血清样本及反应试剂。血清样本的加入是ELISA商品试剂盒中唯一需要使用微量加样器加入样本的步骤。使用微量加样器加样必须注意的关键点是：加样不可太快，要避免加在孔壁上部，不可溅出和产生气泡。
2.加底物溶液。当试剂盒以OPD为底物时，则底物溶液应在反应显色前临时配制。
3.温育。温育所需时间与温度成反比，即温度越高，则所需时间相对较短。
此外，还有合理安排检测量等技巧
ELISA实验标本血清应用技巧：
1、要留意防止呈现严峻溶血。血红蛋白中含有血红素基团，其有类似过氧化物的活性，因而，在以HRP为符号酶的ELISA测定中，如血清标本中血红蛋白浓度较高，则其就很简单在温育过程中吸附于固相，然后与后边参加的HRP底物反应显色。
2、冰冻保存的血清标本须留意防止因停电等形成的重复冻融。标本的重复冻融所发生的机械剪切力将对标本中的蛋白等分子发生损坏效果，然后引起假阴性结果。此外，冻融标本的混匀亦应留意，不要进行剧烈振荡，重复倒置混匀即可。
3、 标本在保存中如呈现细菌污染所造成的的混浊或絮状物时，应离心沉积后取上清检测。
4、样本的收集及血清别离中要留意尽量防止细菌污染，一则细菌的成长，其所分泌的一些酶可能会对抗原抗体等蛋白发生分化效果;二则一些细菌的内源性酶如大肠杆菌的β-半乳糖苷酶本身会对用相应酶作符号的测定方法发生非特异性搅扰。
5、血清标本如是以无菌操作别离，则可以在2～8℃下保存一周，如为有菌操作，则主张冰冻保存。样本的长期保存，应在-70℃以下。
