H2S含量测试盒（比色法）

H2S含量测定试剂盒说明书

微量法100T/96S

注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义：

H2S是一种新型气态信号分子，存在于脑内的神经递质，生理浓度的H2S对神经系统海马的长时程增强功能具有重要的调节作用，并对自发性高血压、出血性休克及肝硬化等疾病的过程发挥着重要的病理生理效应。

测定原理：

H2S与醋酸锌、N, N-二甲基对苯二胺和硫酸铁铵等反应生成亚甲基蓝，亚甲基蓝在665nm处有最大吸收峰，通过测定其吸光值可计算H2S含量。

自备实验用品及仪器：

天平、低温离心机、酶标仪、96孔板、蒸馏水。

试剂组成和配制：

提取液：液体100mL×1瓶，4℃保存。

试剂一：液体25mL×1瓶，4℃保存。

试剂二：液体16mL×1瓶，4℃保存。

试剂三：液体8mL×1瓶，4℃避光保存。

试剂四：液体8mL×1瓶，4℃保存。

试剂五：液体1.5mL×1管，4℃避光保存。

样品处理：

组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液）进行冰浴匀浆，然后10000g，4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
细菌、真菌：按照细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后10000g，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。
血清（浆）：直接测定。

操作表：

	空白管	测定管
样品（μL）		150
H2O（μL）	150
试剂一（μL）	150	150
充分震荡混匀
试剂二（μL）	150	150
10000g，4℃，离心10min，去上清，留沉淀
H2O（μL）	150	150
10000g，4℃，离心10min，去上清，留沉淀
试剂一（μL）	75	75
试剂三（μL）	75	75
充分震荡混匀
试剂四（μL）	75	75
10000rpm，4℃，离心10min，吸取200μL上清于96孔板中
试剂五（μL）	10	10
混匀，25℃静置5min，测定665nm吸光值，记为A测定和A空白，ΔA=A测定-A空白。