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锰过氧化物酶（MnP）测试盒（比色法）
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锰过氧化物酶（Manganese peroxidase，Mnp）试剂盒说明书
微量法100T/96S
注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义
锰过氧化物酶（EC1.11.1.13）是一种含亚铁血红素的过氧化物酶，主要存在于担子菌中，属于木质素降解酶系，能有效的降解木质素及废水和土壤中比较难降解的氯化物，叠氮化合物、DTT，多环芳烃等。
测定原理
锰过氧化物酶在Mn2+存在的条件下，将愈创木酚氧化为四邻甲氧基连酚，在465nm有特征吸收峰。
自备实验用品及仪器
天平、研钵、低温离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、恒温水浴锅。
试剂组成和配制
试剂一：液体110mL×1瓶，4℃保存。
试剂二：液体2mL×1支，4℃保存。
试剂三：液体5mL×1瓶，4℃避光保存。
试剂四：液体2mL×1支，4℃保存。
酶液提取
测定操作
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试剂名称（µL） |
测定管 |
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样本 |
20 |
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试剂一 |
100 |
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试剂二 |
20 |
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试剂三 |
40 |
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试剂四 |
20 |
在微量石英比色皿或96孔板中按顺序加入上述试剂，立即混匀并计时，记录465nm下30s时的吸光值A1和2min30s后的吸光值A2。计算ΔA＝A2-A1。
注意：若一次性测定样本较多，可将试剂一、二、三、四按比例配成混合液，在37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）放置10min以上，测定时加入20µL样本和180µL混合液测定。
酶活计算公式
1．按照蛋白浓度计算
酶活性定义：每毫克蛋白每分钟氧化1nmol愈创木酚所需的酶量为一个酶活力单位。
MnP活性（nmol/min/mg prot）= [ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷(V样×Cpr) ÷T=413×ΔA÷Cpr
2．按照样本质量计算
酶活性定义：每克样品每分钟氧化1nmol愈创木酚所需的酶量为一个酶活力单位。
MnP活性（nmol/min/g 鲜重）= [ΔA×V反总÷（ε×d）×109] ÷（V样×W÷V样总）÷T= 413×ΔA÷W
3．按照细胞数量计算
酶活性定义：每104个细胞每分钟氧化1nmol愈创木酚所需的酶量为一个酶活力单位。
MnP活性（nmol/min/104 cell）=[ΔA×V反总÷（ε×d）×109] ÷（V样×细胞数量÷V样总）÷T
= 413×ΔA÷细胞数量
4．按照液体体积计算
酶活性定义：每毫升培养液每分钟氧化1nmol愈创木酚所需的酶量为一个酶活力单位。
MnP活性（nmol/min/mL）= [ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷V样÷T= 413×ΔA
ε：愈创木酚摩尔消光系数：12100L/mol/cm；d：比色皿光径，1cm；V反总：反应总体积，2×10-4 L；V样：反应中样本体积，0.02mL；V样总：加入提取液体积，1mL；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；W：样本质量，g；T：反应时间，2min
1．按照蛋白浓度计算
酶活性定义：每毫克蛋白每分钟氧化1nmol愈创木酚所需的酶量为一个酶活力单位。
MnP活性（nmol/min/mg prot）= [ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷(V样×Cpr) ÷T=826×ΔA÷Cpr
2．按照样本质量计算
酶活性定义：每克样品每分钟氧化1nmol愈创木酚所需的酶量为一个酶活力单位。
MnP活性（nmol/min/g 鲜重）= [ΔA×V反总÷（ε×d）×109] ÷（V样×W÷V样总）÷T= 826×ΔA÷W
3．按照细胞数量计算
酶活性定义：每104个细胞每分钟氧化1nmol愈创木酚所需的酶量为一个酶活力单位。
MnP活性（nmol/min/104 cell）=[ΔA×V反总÷（ε×d）×109] ÷（V样×细胞数量÷V样总）÷T
= 826×ΔA÷细胞数量
4．按照液体体积计算
酶活性定义：每毫升培养液每分钟氧化1nmol愈创木酚所需的酶量为一个酶活力单位。
MnP活性（nmol/min/mL）= [ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷V样÷T= 826×ΔA
ε：愈创木酚摩尔消光系数：12100L/mol/cm；d：96孔板光径，0.5cm；V反总：反应总体积，2×10-4 L；V样：反应中样本体积，0.02mL；V样总：加入提取液体积，1mL；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；W：样本质量，g；T：反应时间，2min
产品说明书