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木质素含量测试盒(比色法)

试剂别名:
CAS NO.:
分 子 式:
分 子 量:

木质素(Lignin)含量试剂盒说明书

微量法  100管/96样

注意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义

木质素是构成植物细胞壁的成分之一,由聚合的芳香醇构成的一类物质,存在于木质组织中,主要作用是通过形成交织网来硬化细胞壁。木质素主要位于纤维素纤维之间,起抗压作用

测定原理

木质素中的酚羟基发生乙酰化后在280nm处有特征吸收峰,280nm的吸光值高低与木质素含量正相关。

需自备的仪器和用品、

天平、40目筛,玻璃试管、烧杯、离心机,恒温水浴锅、封口膜、烘箱、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板(UV板)、高氯酸,浓硫酸。

试剂组成和配制

试剂一:液体50mL×1瓶,4℃保存。

试剂二:液体50mL×1瓶,4℃保存。

试剂三:液体100mL×1瓶,4℃保存。

样品处理

样品80℃烘干至恒重,粉碎,过40目筛,称取约2mg(记为W)于10mL玻璃试管中(务必用玻璃试管,不可用Ep管)

测定操作表

 

空白管

测定管

样本(mg)

 

2

试剂一(μL)

500

500

高氯酸(μL)

20

20

于10mL玻璃试管中,用封口膜密封,充分混匀,80℃水浴40min,每隔10min震荡一次,然后自然冷却

试剂二(μL)

500

500

充分混匀

上清(μL)

20

20

试剂三(μL)

980(参照注意事项四)

980(参照注意事项四)

取200μL于微量石英比色皿/96孔板,测定280nm处吸光值A。分别记为A空白管和A测定管,ΔA=A测定管-A空白管

计算公式

标准曲线:y = 0.0347x+0.0068,R2=0.9889

Lignin(mg/g干重)= (ΔA-0.0068)÷0.0347×V反总×10-3÷W×T=0.0294×(ΔA-0.0068) ÷0.002×50

V反总:反应总体积:1.02mL;W:样本质量,g;T:稀释倍数

注意事项

  1. 试剂一有毒性,请操作时做好防护措施,加热前必须用封口膜密封,以防气体溢出。
  2. 加热过程中有剧烈反应,震荡时轻摇,以免压力过大喷出造成人身伤害。
  3. 试剂三具有强刺激性,建议操作过程全部在通风橱子操作。
  4. 取上清加试剂三步骤根据自己样品乙酰化程度,试剂三的用量可调整,保证吸光值在0.1-0.8之间即可,并在公式中参与计算。
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