土壤木质素过氧化物酶（SLiP）测试盒（比色法）

土壤木质素过氧化物酶（Soil lignin peroxidase，S-Lip）试剂盒说明书

微量法100T/48S

注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义

木质素过氧化物酶（EC1.11.1.14）是一种含亚铁血红素的过氧化物酶，属于木质素降解酶系，在木质素生物降解、造纸工业、纺织工业、芳香化合物转化与降解及环境污染控制等方面具有较大的应用潜力。

测定原理

木质素过氧化物酶氧化藜芦醇生成藜芦醛，在310nm处有特征吸收峰。

自备实验用品及仪器

天平、低温离心机、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板（UV板）。

试剂组成和配制    

试剂一：液体25mL×1瓶，4℃保存。

试剂二：液体15mL×1瓶，4℃避光保存。

试剂三：液体10mL×1瓶，4℃保存。                     

样品处理

新鲜土样风干，过30-50目筛。

测定操作

	对照管	测定管
土样（g）	0.04	0.04
甲苯（μL）	30	30
25℃静置15min
试剂一（μL）		200
蒸馏水（μL）	200
试剂二（μL）	120	120
试剂三（μL）	80	80
30℃震荡反应3h，冰浴5min，12000g，4℃离心10min，取上清200μL，于微量石英比色皿/96孔板(UV)板，测定310nm处吸光值，分别记为A对照和A测定，△A=A测定- A对照

酶活计算公式

a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下

酶活性定义：每克土壤每天氧化1nmol藜芦醇所需的酶量为一个酶活力单位。

S-LiP活性（nmol/d /g 土样）= ×V反总÷W÷T= 344×△A÷W

ε：藜芦醛摩尔消光系数：9300L/mol/cm；d：比色皿光径，1cm；V反总：反应总体积，0.4mL； W：样本质量，g；T：反应时间，3h

2. 用96孔板测定的计算公式如下

酶活性定义：每克土壤每天氧化1nmol藜芦醇所需的酶量为一个酶活力单位。

S-LiP活性（nmol/d /g 土样）= ×V反总÷W÷T= 688×△A÷W

ε：藜芦醛摩尔消光系数：9300L/mol/cm；d：比色皿光径，0.5cm；V反总：反应总体积，0.4mL； W：样本质量，g；T：反应时间，3h