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土壤锰过氧化物酶(SMnp)测试盒(比色法)

试剂别名:
CAS NO.:
分 子 式:
分 子 量:

土壤锰过氧化物酶(Soil manganese peroxidase,S-Mnp)试剂盒说明书

微量法100T/48S

注意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义

锰过氧化物酶(EC1.11.1.13)是一种含亚铁血红素的过氧化物酶,主要存在于担子菌中,属于木质素降解酶系,能有效的降解木质素及废水和土壤中比较难降解的氯化物,叠氮化合物、DTT,多环芳烃等。

测定原理

锰过氧化物酶在Mn2+存在的条件下,将愈创木酚氧化为四邻甲氧基连酚,在465nm有特征吸收峰。

自备实验用品及仪器

天平、低温离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、震荡仪、甲苯。

试剂组成和配制                 

试剂一:液体12mL×1瓶,4℃保存。

试剂二:液体2mL×1支,4℃保存。

试剂三:液体4mL×1瓶,4℃避光保存。

试剂四:液体2mL×1支,4℃保存。                         

样品处理

新鲜土样风干,过30-50目筛。

测定操作

 

对照管

测定管

土样(mg)

40

40

甲苯(μL)

30

30

25℃,静置15min

试剂一(μL)

140

120

试剂二(μL)

 

20

试剂三(μL)

40

40

试剂四(μL)

20

20

充分混匀,于30℃震荡反应3h,于10000rpm,4℃离心10min,取150μL于微量石英比色皿/96孔板,测定465nm处吸光值,记为A对照管和A测定管,△A=A测定管- A对照管

酶活计算公式

  1. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下

酶活性定义每克土壤每天氧化1nmol愈创木酚所需的酶量为一个酶活力单位。

S-MnP活性(nmol/d /g 土样)= ×V反总÷W÷T= 66.4×△A÷W

ε:愈创木酚摩尔消光系数:12100L/mol/cm;d:比色皿光径,1cm;V反总:反应总体积,0.2mL;W:样本质量,g;T:反应时间,3h

  1. 用96孔板测定的计算公式如下

酶活性定义每克土壤每天氧化1nmol愈创木酚所需的酶量为一个酶活力单位。

S-MnP活性(nmol/d /g土样)= ×V反总÷W÷T= 132.8×△A÷W

ε:愈创木酚摩尔消光系数:12100L/mol/cm;d:比色皿光径,0.5cm;V反总:反应总体积,0.2mL;W:样本质量,g;T:反应时间,3h

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